<acronym id="i4o22"><center id="i4o22"></center></acronym>
<sup id="i4o22"><div id="i4o22"></div></sup>
<acronym id="i4o22"><center id="i4o22"></center></acronym>
  • 021-20985259

噬菌體展示文庫構建及篩選技術



1543913472547381.png

A. 免疫文庫(Immune library)

通過對駱駝免疫抗原,擴增駱駝重鏈抗體VHH基因,建立噬菌體展示的納米抗體文庫,再利用噬菌體展示技術從文庫中篩選獲得抗原特異性的納米抗體(圖1)。迄今為止,已經構建了四十多個噬菌體展示納米抗體免疫文庫,庫容大小均在108-109 CFU。篩選獲得的納米抗體耐熱性能優良,特異性強,親和力高,平衡解離常數KD值一般在nM水平。獲得的納米抗體成為下一步治療性納米抗體應用的寶貴資源。

1543913500227206.png 

圖1  從免疫文庫中篩選納米抗體的流程

Min Zhu, et al, Yakun Wan. J Transl Med. 2014; 12: 352.

Min Zhu, et al, Yakun Wan. Toxins. 2014; 6(12): 3208.

Min Zhu, et al, Yakun Wan. Nanoscale Res Lett. 2014; 9(1): 528.

 

B. 非免疫文庫 (Naive library)

天然非免疫噬菌體展示文庫是免疫文庫的有力支持。當抗原毒性高,致病性強,致死性大或免疫原性低等原因造成無法進行駱駝免疫從而不能構建免疫文庫以篩選相應納米抗體時,天然的非免疫文庫作為一種納米抗體獲得的選擇起著重要的作用。通過采取24只未經人工免疫任何抗原的血樣和一個取自另一只未經免疫的駱駝脾臟,申請人負責構建一個庫容超級大,多樣性豐富的天然非免疫噬菌體展示文庫(圖2)。庫容為6.86×1011 CFU,是目前已知的最大的天然噬菌體展示納米抗體文庫。課題組的研究人員利用降鈣素原PCT和人中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白NGAL為靶點蛋白從該文庫中成功篩選獲得幾株相應的納米抗體,抗體的耐熱性能和親和力均呈現出與免疫文庫來源的納米抗體堪比的水平。以上工作發表在Journal of Nanobiotechnology期刊上,申請了國家發明專利(專利號201410762748.5)。

1543913533810979.png

圖2  非免疫文庫構建流程

Junrong Yan,Min Zhu et al, Yakun Wan, Journal of Nanobiotechnology. 2015; 13: 33

 

C. 合成文庫(Synthetic library)

合成或半合成噬菌體展示納米抗體文庫也是免疫文庫的有力支持。以納米抗體保守框架 cAbBCII10為VHH骨架結構,通過巢式PCR組裝,我們成功地合成了一種CDR3區氨 基酸序列隨機組合排布同時不含半胱氨酸及終止密碼子的噬菌體展示文庫(圖3)。該文庫庫容為 1.65×109 CFU,文庫多樣性豐富。利用人前白蛋白PA和人中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白NGAL 為靶標蛋白,成功篩選得到相應的納米抗體??贵w親和力高,特異性強,耐熱性能良好。以上工作發表在Journal of Translational Medicine 期刊上,申請了國家發明專利(專利號2014104769431)。

1543913683728747.png


1543913741196551.png

 

圖 3:噬菌體展示納米抗體合成文庫的構建及靶點特異性納米抗體的篩選

Junrong Yan, et al, Yakun Wan. Journal of Translational Medicine. 2014;12:343.


上海洛啟生物醫藥技術有限公司版權所有Shanghai Novamab Biopharmaceuticals Co., Ltd   滬ICP備19011463號-1   滬公網安備 31011502016044號 技術支持:朗企科技
3分六合